凱氏定氮儀微量蛋白檢測實(shí)驗操作步驟可以分成消化 蒸餾 滴定三大步驟。

　　凱氏定氮儀微量蛋白檢測實(shí)驗操作步驟


　　第一步：消化


　　將預先稱(chēng)量好的固體硫酸鉀/硫酸銅催化劑粉末約6g（可適當加量）小心加入洗凈干燥的消化管底部；分別將樣品1、2和空白對照（約2mL）各兩份用分析天平差減法直接倒入消化管底部，記錄各組重量；用量筒小心稱(chēng)取濃硫酸16mL加入各消化管底部。將消化管放在管架上，放入消化爐，啟動(dòng)通風(fēng)櫥。設置消化溫度時(shí)間曲線(xiàn)：170℃（根據樣品碳化和沸騰的情況，可適當提高或降低預消化溫度，并盡量避免樣品碳化沸騰掛壁以提高檢測準確度），30min——250℃，10min——370℃（為保證消化效果，可根據情況適當提高至400℃以上），120min。當消化管內出現穩定的恒沸白色酸霧并回流時(shí)，可蓋上消化管蓋以減少硫酸損失。當樣品被消化為明亮的藍綠色或綠色液體時(shí)，即可停止消化，待其冷卻至室溫后，取出蒸餾，關(guān)閉通風(fēng)櫥。


　　第二步：蒸餾


　　向凱氏定氮儀的三個(gè)儲液桶中分別加入足量的35%NaOH、2%H3BO3和蒸餾水（根據處理樣品量，至少1L），旋緊儲液桶蓋子。開(kāi)機，打開(kāi)循環(huán)水，不放入樣品，預蒸餾2min。向樣品管中小心加入20mL蒸餾水以稀釋硫酸，待其變?yōu)槊髁恋乃{色溶液時(shí)，小心放入蒸餾架，卡緊卡槽時(shí)注意將消化樣品管口卡緊以防止氨蒸氣流失；向500mL接收三角瓶中加入少量（約0.6mL）混合指示劑，并設定加硼酸12s，加堿8s，蒸餾8—9min，保存設置后啟動(dòng)儀器。當氨蒸氣隨冷凝水流出時(shí)（注意氨蒸氣管出口浸沒(méi)于接收三角瓶的硼酸溶液中），接收瓶中的硼酸溶液會(huì )由玫紅色變?yōu)樗{色，待蒸餾完畢，用蒸餾水將氨蒸氣管出口的殘液沖洗入接收瓶后取出待測。將樣品管取出，小心倒入水槽，并及時(shí)清洗。放入下一個(gè)樣品管和接收瓶，重復以上操作。蒸餾完畢后，關(guān)閉循環(huán)水。待蒸餾水冷卻后放出。如短時(shí)間內不再使用定氮儀，應用蒸餾水替換酸液和堿液，重復加酸加堿過(guò)程以清洗酸堿管路，維護設備。


　　第三步：滴定


　　用0.1NNaOH、0.1NHCl、蒸餾水分別潤洗酸式滴定管各三次，最后用0.01037N滴定用標準HCl潤洗兩三次。加入0.01037N滴定用標準HCl，并小心放液至0刻度。開(kāi)始滴定，左手控制滴定速度，右手不斷搖動(dòng)混勻三角瓶中溶液。（可預先對樣品消耗鹽酸量有一個(gè)大致的估計，即每毫升0.01N鹽酸可滴定約0.14mg氮）臨近滴定終點(diǎn)時(shí)溶液開(kāi)始由藍色變?yōu)樗{灰色，在最后一滴或半滴時(shí)微微呈現紫紅色。視線(xiàn)與滴定管水平時(shí)讀取并記錄鹽酸消耗量。用0.01037N滴定用標準HCl補滿(mǎn)至0刻度后，可滴定下一個(gè)樣品。以標準硫酸銨檢測的蒸餾回收效果，實(shí)驗結果表明：當氮含量為1mg時(shí)，以1500W蒸餾器蒸餾8min，平均氮回收率為96.9%；以1500W蒸餾器蒸餾9min，平均氮回收率可達100%，蒸餾回收效果理想。建議對于低蛋白含量樣品測量而言，降低蒸餾器功率，并適當延長(cháng)蒸餾時(shí)間可進(jìn)一步改善回收率，從而使結果重復性更好。